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我們的無菌室,到底應該如何滅菌

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首先我們應該了解我們的無菌室應該處于什么狀態,有什么要求。一般情況下,我們的無菌室達到空間潔凈度10000級就可以了,但操作區域例如超凈工作臺、生物安全柜里需要達到潔凈度100級,也就是我們常說的“整體萬級,局部百級”。萬級潔凈度對空間落菌的要求是:靜態檢測,自然沉降菌≤3CFU/皿,百級潔凈度對空間落菌的要求是:靜態檢測,自然沉降菌≤1CFU/皿。也就是說平時我們做的空間驗證,只要不超過這個標準,就是符合要求的,因此也不必太過擔憂。

 

那么,怎樣能夠保證我們的無菌室符合要求?當我們的無菌室出現異常應該如何處理?

 

我們得先從無菌室的滅菌方式開始講。一般無菌室的滅菌方式分為:紫外線照射、臭氧滅菌、化學熏蒸這幾種。這幾種滅菌方式各自有各自的特點,大家可以根據自己的實際情況來選擇合適的滅菌方式,遇到異常難以解決時,也可以考慮增加一種滅菌方式來解決。

 

紫外線照射:紫外線滅菌是利用適當波長的紫外線破壞微生物機體細胞中的DNARNA結構,造成生長性細胞死亡來達到滅菌效果,屬于一種物理方式的滅菌,也是我們微生物檢測無菌室最常用的滅菌方式。該方法操作簡單,使用方便,也比較經濟,可以殺滅各種微生物,包括細菌、病毒、真菌、立克次體以及支原體等,因此在實驗室里,是最常見的滅菌方式。

 

但紫外線滅菌也有一定的缺點,紫外線只能對直接照射到的微生物起到殺滅作用,因此只能對空間中照射到的地方起作用,一些照射不到的死角或者物品的內部是無法達到效果的,因此使用紫外線滅菌的無菌室,也會輔助以一些化學試劑,例如潔爾滅、酒精等消毒劑對死角進行清理。使用紫外線滅菌,應當定期檢測紫外線的強度,若是無法達到要求的強度,就應該考慮更換紫外燈。根據2002年國家衛生部發布的《消毒技術規范》,紫外燈的要求是紫外線強度不得低于70μW/

cm2(紫外燈1m處),而空間內的紫外燈的布局也是有要求的,要求平均每m3不少于 1.5W。也就是說,假如你無菌室是5m2,實驗室高度是3米,那么你的空間體積就是15m3,你空間中使用的紫外燈的功率就不得低于22.5w。按照這個方式就可以算一下你的無菌室需要多少紫外燈了。當紫外線的強度達不到要求時,就需要更換紫外燈了。

 

臭氧滅菌:臭氧是一種強氧化劑,滅菌過程屬生物化學氧化反應。

O3滅菌原理一般有以下三種:

1.臭氧通過氧化分解細菌內部葡萄糖所需的酶,使細菌滅活死亡。

2.直接與細菌、病毒作用,破壞它們的細胞器和DNA、RNA,使細菌的新陳代謝受到破壞,導致細菌死亡。

3.透過細胞膜組織,侵入細胞內,作用于膜內的脂蛋白和內部的脂多糖,改變細胞的通透性,導致細胞溶解死亡。

 

使用臭氧滅菌,殺菌徹底,無殘留,殺菌廣譜,可殺滅細菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等,并可破壞肉毒桿菌毒素。另外,O3對霉菌也有極強的殺滅作用。O3為氣體,能迅速彌漫到整個滅菌空間,滅菌無死角。所以,臭氧滅菌也是目前被廣泛使用的滅菌方式。用臭氧消毒空氣,必須是在封閉空間,且室內無人條件下進行,消毒后至少過 30min 才能進入。另外臭氧的密度比空氣大,在空氣中會迅速下降到空間的底層,因此臭氧發生器也應當安裝在無菌室的頂部。一般滅菌時間選擇30min即可,要求空間中臭氧濃度不低于20mg/m3 。

 

化學熏蒸:化學熏蒸是一種十分傳統的空間滅菌方式,一般是采用易揮發氣化的化學物質的蒸汽對空間微生物進行殺滅的目的,一般常用甲醛、戊二醛、過氧化氫、過氧乙酸等。

 

這里以常用的甲醛熏蒸為例。一般甲醛熏蒸又稱甲醛高錳酸鉀熏蒸,將40%的甲醛溶液加入到高錳酸鉀溶液中,二者發生反應,放出大量的熱使甲醛蒸發到空間中,從而對無菌室進行滅菌。一般甲醛熏蒸的滅菌效果比較理想,對霉菌等較難清除的污染菌也有較好的殺滅效果,因此在無菌室被霉菌污染時,通常都是使用甲醛進行熏蒸來徹底消滅污染源。

 

但是甲醛熏蒸的缺點也是很明顯的,因為甲醛是一種強致癌性的化學品,對人體的傷害較大,在使用過程中需要特別注意,并且殘留量也要進行嚴格的控制。每次熏蒸后,至少需要通風24h才可以使用。

 

目前對熏蒸后甲醛的殘留量并沒有明確要求,還是要通過經驗來判斷,目前國家對居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m3,所以我們也可使用甲醛含量測定儀來對熏蒸后的空間進行檢測。目前甲醛熏蒸滅菌的方法食品檢測無菌室的滅菌中已經較少使用,主要也是因為操作比較繁瑣,滅菌時間較長,進行一次甲醛熏蒸之后,會有幾天無法使用無菌室進行檢測,所以只有在其他滅菌方法無法達到理想的滅菌效果時,才會考慮進行甲醛熏蒸。

 

而其實這種滅菌方式目前在很多藥企的無菌室滅菌,還是會經常用到的,另外,有些生產區域如果長期被霉菌污染,也會考慮用甲醛熏蒸的方法來解決。

 

了解了這幾種常用的無菌室滅菌方式,在我們日常的工作中也可以根據自己實驗室情況進行選擇,尤其是長期使用一種滅菌方式若是滅菌效果達不到理想的效果時,可以根據實際情況更換滅菌方式,或者引進一種新的滅菌方式兩者結合,以期達到預想的效果。

 

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